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              protein purification resin

              CloneEZ PCR克隆试剂盒

              金斯瑞CloneEZ PCR克隆试剂盒成功解决了PCR产物酶切带来的各种难题实现了PCR产物不经过酶切直接克隆入载体!

              产品特性

              • 适用于各种自备载体插入片断或者酶切位点,30 min即可将产物"同源置换"到目标载体上
              • 重组效率高
              • 高通量操作,批量克隆(可以用8连管,244896孔板做高通量克隆)
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              L00339
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              ¥1750
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              CloneEZ PCR克隆试剂盒工作原理

              CloneEZ PCR克隆试剂盒操作非常方便,适用于各种PCR酶(常规Taq各种高保真酶均可)的扩增产物. 根据酶切后线性化载体的两端序列,分别在PCR的两条引物的5'端加上15 base与载体末端同源的序列,PCR扩增的产物两端就会分别带有15 bp与线性化载体两端相同的序列
              图1: PCR产物和线性化载体* 与CloneEZ专利酶充分混匀22 ℃温浴30 min后按传统方法转化E. coli感受态细胞,就可以高效定向地将PCR产物克隆到目标载体上,表达产物**也没有多余的氨基酸

              *载体只需线性化不需去磷酸化载体不用连接
              **PCR产物不需酶切不需末端补平

              CloneEZ PCR克隆试剂盒 VS 传统克隆


                CloneEZ PCR无缝克隆技术
              传统克隆
              是否定向克隆
              X
              是否需要限制性内切酶
              X
              是否需要连接酶
              X
              所需试剂
              • CloneEZ酶(50 ul, 5 U/ul)
              • 10X反应缓冲液(100 ul)
              • pUC57线性载体(Kpnl/HindIII, 10 ul, 30 ng/ul)
              • 1 kb 插入片段( 10 ul, 100 ng/ul)
              • 连接酶
              • 10X反应缓冲液
              长片段的高效克隆 4 kb 2 kb 1 kb
              NA
              93% 95% 100%
              反应时间
              PCR Cloning Kit

              CloneEZ PCR克隆试剂盒单酶切结果=双酶切克隆!

              图2: 在有些PCR产物克隆中载体需要双酶切其中一个酶切位点非常罕有内切酶很昂贵或很难购买到或者实验室中恰好双酶切中其中一个酶恰好用完而且购买需要很长时间而这些又都是实验所必需的从而使后续的克隆工作难以快速顺利完成。如果在载体上两个酶切位点相距<100 bp使用金斯瑞CloneEZ可以只单酶切克隆即可完全可以得到双酶切克隆的结果两个酶切位点间的多余序列会彻底去无踪克隆效率只会稍微地降低而已!

              CloneEZ PCR克隆试剂盒的转化率和重组率

              图3: 金斯瑞CloneEZ PCR克隆试剂盒所克隆的片段可以来自PCR扩增产物也可以来自酶切产物但载体和片段末端的15 bp同源序列是必需的。对于<4 kb DNA片段CloneEZ PCR克隆通常具有95%以上的重组效率。

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